流式細胞術是一種重要的細胞分析技術，可以用于細胞計數(shù)、細胞表型分析和細胞排序等。在進行流式細胞術之前，進行質量控制是非常重要的，以確保實驗的準確性和可靠性。本文將詳細介紹流式細胞術的質量控制方法。

1. 流體系統(tǒng)校準

流體系統(tǒng)包括流量計和壓力傳感器。首先，通過測量實際流速和壓力來校準流量計和壓力傳感器。將標準流體注入流量計，測量流速并校準。將標準壓力注入壓力傳感器并測量輸出值，然后校準。

2. 激光系統(tǒng)校準

校準激光系統(tǒng)旨在確定激光束位置，以便在樣本容器中獲得正確的光學讀數(shù)。使用校準珠固定在流式細胞儀樣本管中，使用激光照射校準珠并確定激光束位置。

3. 光學系統(tǒng)校準

校準光學系統(tǒng)是確保樣本分析時光學讀數(shù)準確的關鍵。校準光學系統(tǒng)包括檢測器和同步器。檢測器負責測量樣品中免疫染色顆粒的數(shù)量和大小。同步器負責確保檢測器測量樣品時以正確的頻率進行測量。

4. 標準顆粒校準

流式細胞儀校準的最后一個步驟是使用標準微粒校準儀對樣本進行標準化。使用寬敞的樣品管，在不同的濃度下測試標準微粒。校準標準曲線后，流式細胞儀可以精確地計算樣品中特定免疫染色顆粒的數(shù)目和特征。

流式細胞儀校準

1.清潔流式細胞儀的樣品室，并檢查激光器和光路系統(tǒng)是否正常工作。

2.使用粒子標準物質檢查細胞儀的散射、熒光和時間參數(shù)的準確性。

3.清洗和校準流式細胞儀的液體系統(tǒng)，確保流速和樣本量的準確控制。

流式細胞儀性能的質量控制

a.定期檢查流式細胞儀的性能參數(shù)，包括散射靈敏度、熒光檢測靈敏度和時間分辨率。

b.使用校準顆粒檢驗流速的準確性和一致性，

c.根據(jù)實驗需要，使用合適的質檢顆粒進行分辨率和強度的調(diào)

樣品準備

1.均勻懸浮細胞樣本，避免細胞團聚和沉積。可通過離心和重新懸浮樣本來實現(xiàn)。

2.使用質量可靠的細胞染色方法，確保染色的準確性和一致性。

3.調(diào)整樣本的濃度，以避免過度聚焦和細胞過于稀疏而損失信號。

樣本純度的質量控制

a.使用合適的負對照和正對照來評估染色的純度。例如，使用未染色細胞作為負對照，使用己知陽性標記的細胞作為正對照

b.定期檢查染色結果的一致性，確保負對照細胞沒有陽性標記正對照細胞有預期的陽性標記

CytoFLEX即用型日常QC質控熒光微球儀器校準品中文介紹

CytoFLEX即用型每日QC熒光微球是3μm熒光微球的懸浮液，可用于流式細胞儀光學對準和液流系統(tǒng)的日常驗證。該產(chǎn)品以預稀釋的即用型形式提供，在以下波長下激發(fā)時，熒光發(fā)射波長在355nm至800nm 之間：355nm、375nm、405nm、488nm、561nm和638nm。將混合物懸浮在含有表面活性劑和穩(wěn)定劑的水介質中。C65719取代了 CytoFLEX 日常QC熒光球 B53230，適用于CytoFLEX 細胞儀平臺。

CytoFLEX即用型日常QC質控熒光微球儀器校準品英文介紹

CytoFLEX Ready to Use Daily QC Fluorospheres is a suspension of 3 µm fluorescent microspheres, which may be used for daily verification of the flow cytometer's optical alignment and fluidics system. This product is provided in a pre-diluted, ready-to-use format, with a fluorescence emission between 355 nm to 800 nm when excited at: 355 nm, 375 nm, 405 nm, 488 nm, 561 nm, and 638 nm. The mixture is suspended in an aqueous medium containing surfactants and stabilizers. Click here for CytoFLEX Ready to Use Daily QC Fluorospheres Instructions for Use. This product replaces the CytoFLEX Daily QC Fluorospheres, B53230, and should be used with the CytoFLEX cytometer platform.

CytoFLEX即用型日常QC質控熒光微球儀器校準品操作流程

1. Use the filter set recommended by the manufacturer for detecting the appropriate fluorescence parameters (refer to the CytoFLEX Platform IFU).

2. Ensure that the target value file for the specific lot of CytoFLEX Ready to Use Daily QC Fluorospheres has been loaded into the flow cytometer software. Refer to your CytoFLEX Platform IFU for instructions on importing your lot-specific target value file.

3. Vigorously mix the CytoFLEX Ready to Use Daily QC Fluorospheres vial using a vortex mixer for 2-3 seconds.

4. Add:

4. 10 drops of fluorospheres to a tube if using Semi Automatic (tube) Sample Injection Mode.

b. 3-4 drops of fluorospheres to a well for either Standard 96-well plate or Deep-well plate for the plate loader injection mode.

5. Run the Quality Control (QC) protocol per the instructions in your CytoFLEX Platform (IFU).

CytoFLEX即用型日常QC質控熒光微球儀器校準品注意事項

1. 產(chǎn)品為即用型產(chǎn)品，無需額外配制,直接使用。

2. 如果分裝，密封好，5天內(nèi)用完。

3. 熒光微球長時間靜置，會自然沉降。確保在使用前將熒光球充分重懸搖勻。

4. 請勿使用超過樣品瓶標簽上有效期的熒光球。

5. 產(chǎn)品冷藏勿凍。

6. 處理此試劑時，請使用良好實驗室規(guī)范 （GLP）。

7. 本試劑含有防腐劑，如果發(fā)生皮膚或眼睛接觸，請用水及時深度清洗。

流式細胞儀校準報告的目的是記錄所有流式細胞儀校準過程的詳細信息。報告應包括以下信息：

1. 日期和時間

2. 流體系統(tǒng)校準數(shù)據(jù)

3. 激光系統(tǒng)校準數(shù)據(jù)

4. 光學系統(tǒng)校準數(shù)據(jù)

5. 標準微粒校準數(shù)據(jù)

6. 校準珠校準數(shù)據(jù)

7. 校準過程中發(fā)現(xiàn)的任何問題或異常情況

8. 執(zhí)行校準的技術人員的姓名和簽名